【摘要】 【目的】研究翼状胬肉组织病理学特征，探讨多能干细胞在翼状胬肉发生过程中的作用。
【方法】对218例手术切除翼状胬肉标本,进行形态学、免疫组织化学和免疫荧光共聚焦显微镜观察其形态学变化及CD34、波形纤维蛋白（VIM）、平滑肌肌动蛋白（SMA），S－100在翼状胬肉中的表达。
【结果】纤维组织增生及新生血管形成为翼状胬肉的主要病理改变。增生的纤维组织不同区域变化不一，主要呈现两类变化：一为排列致密，类似巩膜纤维组织；另外就是疏松区：仅见一些梭形、多角形、星状具有一些突起的纤维母细胞样的细胞，疏松排列，之间无明显的胶原纤维存在。免疫组织化学和免疫荧光显示一些增生活跃的纤维母细胞明显表达CD34，成熟的纤维组织内的纤维细胞CD34则为阴性。此外，218例中56例显示了平滑肌的存在，44例有脂肪组织。
【结论】翼状胬肉组织中的纤维组织源自于间充质干细胞，并可向平滑肌及脂肪组织分化。
【关键词】 翼状胬肉； 病理学； 间充质干细胞； 纤维组织； 细胞起源
翼状胬肉是眼科较为常见的眼表面疾病之一。根据流行病学的调查结果显示[1]，它与阳光、风尘等各种外界因素的慢性刺激和局部慢性炎症反应有关。目前关于翼状胬肉发病机制有多种理论和学说,但均未得到公认。本研究从组织病理学出发，结合免疫组化及免疫荧光共聚焦显微镜对翼状胬肉进行研究，旨在探讨间充质干细胞在翼状胬肉发生过程中的可能机制。
1 材料和方法
1.1 标本
218例经临床及病理诊断为翼状胬肉的石蜡标本，均来自中山大学中山眼科中心病理室。其中50例标本进行了免疫组织化学染色。另外，新近收到的新鲜标本除一半进行常规的石蜡处理外，另一半改用多聚甲醛固定，冰冻切片，免疫荧光染色共焦显微镜观察。
1.2 主要试剂
一抗 SMA、VIM、CD34，S-100，迈新公司。荧光抗体FITC抗鼠，Dako公司。Hoechst，碧云天公司。
1.3 染色方法
1.3.1 PAS染色 常规连续切片脱蜡至水，5 g/L 高碘酸氧化10 min，蒸馏水稍洗，雪夫试剂（Schiffs液）避光染色20 min，5 g/L 偏重亚硫酸钠滴洗 3 min × 3次，蒸馏水稍洗，苏木素复染 5 min，流水浸洗，脱水、透明、常规中性树胶封片。阳性表现为紫红色。
1.3.2 石蜡切片免疫组织化学染色 标本经100 g/L 甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，作4 μm 连续切片。切片脱蜡至水，抗原修复95 ℃ 10 min，PBS 3 min × 3次，30 mL/L H2O2，37 ℃ 10 min，PBS 3 min × 3次，正常山羊血清封闭10 min，擦干后加一抗，37 ℃孵育 60 min，PBS 3 min × 3次，Post-blocking 37 ℃ 20 min，PBS 3 min × 3次，poly-HRP Anti-Ms/Rb IgG 37 ℃ 30 min，PBS 3 min × 3次，DAB显色, 苏木素复染 5 min，流水浸洗，脱水、透明、常规中性树胶封片。阳性表现为棕色。
1.3.3 免疫荧光染色共聚焦显微镜观察 标本经 40 g/L 多聚甲醛固定，经过 100 g/L、200 g/L、300 g/L 的蔗糖溶液各 8 h梯度脱水后，作 8 μm 连续切片。冰冻切片复温入水，30 mL/L H2O2 ,37 ℃ 10 min，PBS 3 min × 3次，正常山羊血清封闭10 min，擦干后加一抗，37 ℃孵育 60 min， 二抗FITC 37 ℃水育箱中孵育40 min。Hoechst染核，室温 5 min，PBS 3 min × 3次，透明，体积分数为75％的甘油封片，激光共聚焦显微(Zeiss,510 Meta)镜下观察。阳性表现为苹果绿色。
2 结 果
翼状胬肉在组织学上主要由纤维血管组织构成，其上为来自结膜或角膜的鳞状上皮覆盖。一些表面上皮内能见到杯状细胞，故主要来自结膜上皮；一些上皮细胞内生，植入到其下增生的纤维结组织中，在纤维组织内形成上皮条索或上皮团，并围成一些上皮衬里的囊腔。
218例翼状胬肉中均能见到增生的纤维组织，不同病例增生纤维组织的量变化不完全相同，同一病例不同区域变化也不完全一致。一些纤维排列排列密，较为成熟，类似巩膜中的纤维结缔组织（图1A）；一些区域表现为增生活跃，为梭形、多角形、星状具有一些突起的纤维母细胞样的细胞（图1B），疏松排列，其间无明显的胶原纤维存在。在成熟的巩膜样纤维与增生活跃区间可有过渡区，即纤维母细胞样细胞伴有少量纤维小束或散在的纤维存在。一些纤维呈嗜碱性样变性，这些变性的纤维多分布在上皮下；纤维组织中的纤维及血管所占的比例可因人而异，血管的性质不同病例也不完全一致：218例中除1例未见到明显的血管外，所有病例均出现新生的毛细血管。毛细血管形态大小极不一致，有单个细胞围成的血管、小毛细血管和中毛细血管，95例能见到静脉性血管，31例尚有一些动脉性血管存在（图1C）。
此外，翼状胬肉组织中56例尚能见到一些粉红色、略带嗜碱性的小团状、梭形或不规则形的细胞束（图1D），束中细胞呈长梭形、两端略圆钝，细胞边界欠清晰，核也呈两端钝圆的短梭形。44例组织中出现分化好、典型的脂肪细胞（图1E）。4例组织中能见到神经纤维束。
VIM免疫组织化学染色在大部分纤维细胞（图2A）、血管内皮细胞、血管壁及周细胞呈阳性反应。CD34免疫组织化学染色：增生活跃区的纤维母细胞样细胞呈阳性反应（图2B），但成熟的纤维组织为阴性反应。血管内皮细胞及周细胞呈阳性反应，内皮细胞与周细胞间的血管壁则为阴性。S-100染色神经纤维丝及脂肪细胞均呈阳性反应。SMA染色显示上述HE染色中略带嗜碱性的小团状、梭形或不规则形的细胞束呈阳性反应（图2C），证明为平滑肌。各种上述抗体免疫荧光染色共聚焦显微镜进一步证明增生活跃的细胞为阳性反应，呈现为苹果绿色（图2D、E）。
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