氩激光诱发兔视网膜下新生血管的组织病理及超微结构观察
第四军医大学学报2000年第21卷第2期
白建伟 惠延年 李学荣
摘 要: 目的 探讨视网膜下新生血管（SRNV）的发病机制及发生、发展特点.方法 用高强度氩激光光凝兔视网膜，光、电镜观察视网膜、脉络膜组织病理及超微结构改变.结果 光凝后1～3 d，光镜下光斑区Bruch膜及视网膜色素上皮（RPE）层断裂，组织水肿、出血、毛细血管闭塞.电镜下光感受器细胞内、外节溶解，白细胞浸润，巨噬细胞聚集.光凝后1 wk，新生血管长入光斑.结论 高强度激光所造成的视网膜外层及脉络膜的破坏、局部缺血、炎性反应、出血等，在SRNV的发病机制中具有重要作用.
关键词：新生血管；激光光凝术；病理组织学；超微结构
0 引言
视网膜下新生血管（subretinal neovascularization, SRNV），又称脉络膜新生血管（choroidal neovascularization, CNV）是很多后极部眼底病的显著特征［1,2］.许多学者认为，光凝疗法是治疗眼底新生血管唯一有效的方法.而光凝疗法本身又可引起SRNV［3,4］.目前，国内仅限于部分临床研究，对SRNV的病因、病理所知有限，对其发生、发展的特点及光凝治疗的一些规律尚在认识中.我们采用高能量氩激光光凝兔视网膜诱发SRNV，对其发生、发展过程进行了组织病理及超微结构观察，有关方面的研究国内尚未见报道.
1 材料和方法
1.1 材料 动物模型用健康灰色家兔10只，体质量2.5～3 kg，雌雄兼用. 用氯胺酮（50 mg．kg-1），异丙嗪（25 mg．kg-1）im麻醉，5 mL．L-1托品酰胺及10 mL．L-1新福林散瞳，5 mL．L-1的卡因点眼后安放三面镜，用美国HGM公司产Compac型激光机的氩蓝绿激光（波长488.0～514.5 nm）作视网膜光凝. 部位在视乳头及髓线下方约8～10 PD，激光功率0.9 w及0.7 W（左右眼随机决定激光用量），曝光时间0.1 s，光斑直径50μm. 每眼共作20个光凝斑，每光斑间距300 μm.
1.2 方法 分别于光凝后1,3 d，1,2,3,4,6 wk及3,4 mo处死动物，摘除眼球，去除眼前节，将眼后节组织置入30 mL．L-1戊二醛中固定24 h，切取光凝部位的眼组织，分成1 mm×3 mm的条块，继续固定24 h，再放入0.1 mol．L-1磷酸缓冲液中浸洗30 min，10 mL．L-1锇酸后固定1 h，乙醇、丙酮逐级脱水，环氧树脂812浸透包埋、聚合、切片厚1μm，经美蓝及碱性复红染色后作光学显微镜检查.用同一定位好的标本块作超薄切片，醋酸铀及枸橼酸铅染色后作透射电镜检查并照像.
2 结果
2.1 光学显微镜观察 光凝后1 d，光斑区Bruch膜及视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium, RPE）层断裂，组织水肿、出血.脉络膜毛细血管闭塞、大血管破裂（Fig 1）. 3 d时，RPE细胞肿胀、破损.1 wk时，水肿消退，RPE细胞呈层状增殖. 1～6 wk，光斑区见CNV，大部分位于光斑边缘（Fig2,3）. 光凝后3～4 mo，胶原纤维增生长入光斑.
图 1 光凝后1 d,光斑区Bruch膜(B)及视网膜色素上皮层(R)断裂，视网膜、脉络膜组织严重破损、水肿、出血，毛细血管闭塞.
图 2 光凝后1 wk，光斑边缘视网膜下腔见新生血管(NV)
图 3 光凝后4 wk，光斑边缘视网膜下腔内见新生血管(NV)，周围有RPE增殖
2.2 透射电镜观察 光凝后1 d，光斑区光感受器细胞内、外节溶解，白细胞浸润、巨噬细胞聚集（Fig4），内、外核层及RPE细胞核凝固坏死. 3 d时，光斑边缘RPE细胞内线粒体大量空泡变性.光凝后1 wk，光斑边缘脉络膜毛细血管增生，沿断裂的Bruch膜长入光斑（Fig5）. 光斑中心区仍见巨噬细胞. 光凝后2 wk，光斑中心基底部见新生血管.3 wk时，视网膜下腔有内皮细胞增生. 周围有RPE细胞增殖包绕（Fig6）. 光凝后4 wk，光斑边缘视网膜下腔见大量新生血管.在另一些标本中，视网膜下腔有新生血管，附近可见周细胞（Fig7）. 2 mo时，光斑边缘仍见脉络膜毛细血管增生长入光斑. 3～4 mo，光斑区见大量胶原纤维. （0.9 W及0.7 W激光功率,光凝后眼底改变及病理检查结果基本相同，无统计学差异［4］，以下不再分述）.
图 4 光凝后1 d,光斑区光感受器细胞内、外节溶解，周围有白细胞浸润（箭头），巨噬细胞聚集 (M)
图 5 光凝后1 wk,光斑边缘脉络膜毛细血管增生，沿断裂的Bruch膜(B)
长入光斑. RPE细胞(R)增殖呈纺锤形.箭头示脉络膜毛细血管基底膜
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