兔实验性急性高眼压模型视网膜谷氨酸的变化

　　中华眼科杂志2000年第36卷第5期

　　王平宝　蒋幼芹　黄佩刚　陈主初

　　摘　要　目的　研究兔实验性急性高眼压状态下视网膜谷氨酸含量的变化，探讨谷氨酸在青光眼视神经损害中的作用。方法　应用邻苯二甲醛衍生法、高效液相色谱仪测定视网膜谷氨酸的含量。将18只大白兔分成3组，其中2个实验组，1个正常对照组，每组均6只兔（6只眼）。实验1组：每只兔随机选取1只眼行生理盐水前房内高压灌注，60 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)持续4 h。另1只眼生理盐水前房内灌注，方法同前，但压力为20 mm Hg作自身对照。实验2组：每只兔随机选1只眼用30 mm Hg压力前房生理盐水灌注，另1只眼20 mm Hg灌注作自身对照，持续4 h。正常对照组不做前房灌注，每只兔任选1只眼。以上各组均在摘除眼球后做视网膜谷氨酸测定。结果　实验1、2组兔的高眼压眼（60 mm Hg，30 mm Hg）均较对侧眼（20 mm Hg）谷氨酸水平明显增高（P＜0.05）。结论　急性高眼压可导致视网膜谷氨酸水平增高，谷氨酸可能参与了高眼压对视网膜的损伤。

　　关键词：谷氨酸；视网膜；青光眼

　　兴奋性氨基酸（excitatory amino acids, EAAs）主要包括谷氨酸与天门冬氨酸，是中枢神经系统的主要兴奋性神经递质，也是视网膜神经元的主要兴奋性递质［1］。EAAs作用于氨基酸受体，介导了中枢神经系统的信息传递。若EAAs过量，将导致兴奋毒性作用，引起神经元的死亡。已有许多研究证实，EAAs在视网膜缺血及视神经损伤中，起着重要作用［2,3］。

　　目前，EAAs与视网膜关系的探讨主要在视网膜缺血的研究上，而与青光眼关系的研究尚少。我们拟通过兔急性高眼压模型，了解高眼压模型视网膜谷氨酸的含量变化，为阐明谷氨酸在青光眼性视神经损伤中的作用提供实验依据。

　　 材料与方法

　　一、实验动物

　　成年健康大白兔（中国家兔）18只，雌雄不限，体重1.4～2.1 kg（由湖南医科大学湘雅医院动物室提供）。术前眼压7～22 mm hg (1 mm Hg=0.133 kPa)，平均(12.56±3.37）mm Hg (日本Kowa公司Perkins眼压计测量)。

　　二、方法

　　1. 分组：大白兔18只，共分3组，每组间术前眼压无差异。实验1组：6只兔。采用生理盐水前房内持续灌注法，将每只兔的1只眼眼压升高至60 mm Hg；另1只眼作为对照，维持灌注眼压20 mm Hg。实验2组：6只兔。每只兔的1只眼维持灌注眼压30 mm Hg，对侧眼维持眼压20 mm Hg作为对照，处理方法同实验1组。正常对照组：6只兔（6只眼）。

　　2. 动物模型制备：动物称重，耳缘静脉注射3%戊巴比妥钠(约1 ml/kg),随机选1只眼作为高眼压灌注眼，用5号静脉输液针头行前房穿刺，输液器接生理盐水，血压计加压维持所需眼压，持续4 h。正常对照组作为空白对照，不作前房灌注，也不需麻醉。

　　3.检测样品制备：击头处死动物，迅速取出眼球置培养皿中，于放大镜下冰上操作，沿角膜缘切开眼球，去晶状体及玻璃体；无水酒精固定0.5 min，轻轻剥取视网膜，滤纸吸干酒精，称重，置匀浆器内，加1 ml无水酒精，冰上匀浆，至乳糜状。转入eppendrof管，4℃，15000 r/min离心30 min。取上清，-20℃保存备用。

　　4. 检测方法：采用邻苯二甲醛柱前衍生法［4］,高效液相色谱仪与荧光光度检测器测定样品中的氨基酸。通过标准品的测定,采用外算法根据氨基酸的色谱峰面积计算样品中的谷氨酸含量。

　　三、统计学处理：采用t检验。

　　 结果

　　一、实验1组

　　视网膜谷氨酸含量测定(表1)：60 mm Hg灌注眼为（65.51±18.45）10-5mmol/g，20 mm Hg灌注眼为（42.02±22.45）10-5mmol/g,二者差异有显著性(P＜0.05)。

　　表1　3组兔视网膜谷氨酸含量比较

　　二、实验2组

　　视网膜谷氨酸含量测定（表1）：30 mm Hg灌注眼为（68.67±32.65）10-5mmol/g，20 mm Hg灌注眼为(38.38±13.42)10-5mmol/g，二者差异亦有显著性(P＜0.05)。

[1] [2] 下一页