作者：左 玲 王桂云 车松天 赵惠敏 裴 颖 作者单位：吉林大学第二医院眼科,吉林 长春 130041
【摘要】 目的 研究微量全氟加萘（PFD）对视网膜的毒性作用，为临床应用提供实验性参考依据。方法 将30 μl的PFD及BSS液体分别直接注射到家兔视网膜表面。注射液体后每天用检眼镜观察家兔视网膜情况；在注射后的4、7、14、21 d，分别对每个实验组及对照组做光学显微镜及透射电镜的视网膜组织切片观察。结果 所有实验样本检眼镜检查及光镜病理组织学检查在各个时间点均正常，未发现视网膜有任何病理改变。透射电镜检查，4 d时，没有对视网膜造成实质性的损害；从7 d开始，各个实验组的视网膜都出现了光感受器外节、外丛状层的损害，光感受器变性，内核细胞囊泡形成，神经节细胞受损，内层视网膜坏死，视网膜内吞噬细胞反应，视网膜色素上皮细胞吞噬膜盘，顶部微绒毛脱落等病理变化。结论 微量的PFD存在于眼内，视网膜可出现超微结构的病理改变，但无显微结构的变化，在宏观上也无任何改变。视网膜毒性作用随着残留时间的延续而加大。提示眼内微量残留PFD应该在4 d之内取出。
【关键词】 全氟加萘 视网膜 病理学
对一些复杂的玻璃体视网膜疾病，如糖尿病视网膜病变、增殖性玻璃体视网膜病变等，在进行玻璃体切割的手术中常常需要用重水来压平隆起的视网膜，以便于进一步的操作。全氟加萘(perfluorodecalin，PFD)是重水的一种，由饱和碳碳和碳氟原子分子链组成的含有10个碳原子的重的惰性液体。因其独有的特性而被临床用作玻璃体手术中的“液体操作工具”〔1〕。在应用过程中发现PFD对视网膜组织有一定的毒性作用，但是关于微量PFD至少残留多长时间会对视网膜的超微结构带来损伤少见报道。本文通过对家兔玻璃体腔注射微量PFD，追踪观察视网膜超微结构的改变，旨在探讨微量PFD至少残留多长时间会对视网膜造成损害。
1 材料与方法
1.1 实验动物、主要试剂及仪器 健康实验家兔，体重2.5 kg，雌雄各半，购于本校实验动物中心。PFD（德国），BSS液（爱尔康公司）；OMS610显微镜（日本），100 μl微量进样器（上海），YZ6E检眼镜（苏州），JEM1200EX透射电镜（日本）。
1.2 分组及手术方法 将16只实验家兔32眼随机设为实验组12只24眼、对照组4只8眼。实验组随机分为注射PFD后的4 d组、7 d组、14 d组、21 d组，每组各3只6眼；对照组随机分为注射BSS后的4 d组、7 d组、14 d组、21 d组，每组各1只2眼。实验组给予PFD 30 μl。对照组给予等量BSS液体。实验前3 d，用0.25%氯霉素眼液点术眼。实验时美多丽P术眼散瞳，用5%乌拉坦溶液耳缘静脉注射，按5 ml/kg溶液实施全身麻醉，贝诺喜眼液点术眼角膜实施眼表麻。麻醉后，眼周碘酊消毒，铺无菌洞巾，置于显微镜下，结膜囊冲洗，用穿刺刀在距角巩膜缘2 mm的11点及1点处垂直睫状体平坦部刺向玻璃体中心，角膜上置一斜镜，将导光纤维伸入眼内。在其照明下，实验组用改良后无菌的100 μl微量进样器将30 μl已消毒的PFD注射到各实验组眼的下方视网膜表面；对照组同法注入等量BSS液体。用50的尼龙线缝合巩膜穿刺口，庆大霉素1万单位、地塞米松2 mg结膜下注射，金霉素眼膏、1%阿托品眼膏涂眼。
1.3 术后处理和观察 每天用检眼镜观察家兔视网膜情况；在注射PFD后的4、7、14、21 d分别对各组家兔实施全身麻醉。每只眼用直肌线固定4条直肌，在检眼镜直视下，用龙胆紫在视网膜相应的巩膜壁上标记。然后处死家兔，摘取眼球，将龙胆紫标记处的视网膜取下，在滤纸上铺平后，分成两份。一份浸泡在10%福尔马林溶液的标本瓶中并标记，然后行视网膜组织切片，HE染色，光学显微镜下观察结果；一份放入4%戊二醛溶液的标本瓶里并标记，行透射电镜组织学切片并透射电镜下观察结果。将实验组未接触过PFD的视网膜取下，同上法进行处理。
1.4 统计学分析 对所有实验样本视网膜透射电镜下的病理变化进行等级评定(分为5个等级)，并进行KruskalWallis检验。
2 结 果
2.1 检眼镜检查 各实验组玻璃体透明，视网膜呈橘红色反光，在其表面可见边界清晰、聚集成滴的PFD。对照组的玻璃体、视网膜未见明显异常改变。
2.2 视网膜组织切片HE染色结果 实验组在4、7、14、21 d时接触过PFD的视网膜组织与对照组相比均无明显改变，视网膜结构完整，视网膜各层细胞排列规则、完整，未见炎症、变性、坏死等改变（见图1、图2）。
2.3 透射电镜检查结果 4 d时，实验组接触过PFD的视网膜，各层结构清晰完整，细胞排列规则，形态正常，细胞膜透明，细胞完整（图3A）。7 d时，实验组接触过PFD的视网膜中，可见视杆细胞外节的膜盘排列紊乱（图3B），细胞形态正常，结构完整。14 d时，实验组接触过PFD的视网膜中，视杆细胞外节的膜盘排列紊乱，局部均质化，色素上皮细胞顶部可见微绒毛减少（图3C）。21 d时，实验组接触过PFD的视网膜中，视杆细胞外节的膜盘排列紊乱，局部均质化，膜盘数量减少、结构不清，内节中线粒体肿胀，脊断裂，视细胞顶部胞质可见小空泡结构，内节内线粒体肿胀，可见髓样小体；色素上皮细胞顶部可见微绒毛减少；内核层的双极细胞可见空泡结构，周围轴突内可见髓样小体；节细胞可见许多空泡（图3D）。
2.4 统计学分析结果 KruskalWallis检验分析，有显著性差异（P=0.0187，＜0.05）,见表1。表1 KruskalWallis检验分析结果
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