郑建秋   刘平   傅松滨   王建文   刘建巨

哈尔滨医科大学第一临床医学院附属眼科医院   哈尔滨医科大学   150001

目的：克隆一个先天性遗传性核性白内障家系致病基因GJA8，研究该基因野生型（wGJA8）和突变型（mGJA8）在体外真核细胞系中的表达。

方法：以正常人类和家系患者基因组DNA为模板进行PCR扩增，分别钓取wGJA8和mGJA8。构建质粒pEGFP-N1-wGJA8和pEGFP-N1-mGJA8，经双酶切测序鉴定后分别转染COS7细胞，用荧光显微镜观察蛋白表达情况，Western-bloting和免疫组化法检测蛋白表达。

结果：目的基因wGJA8和mGJA8克隆成功，经双酶切和DNA测序证实质粒pEGFP-N1-wGJA8和pEGFP-N1-mGJA8构建成功。荧光显微镜观察到野生型蛋白和突变型蛋白在体外培养的COS7细胞内均有表达，Western-bloting和免疫组化显示基因wGJA8和mGJA8在COS7细胞中均有蛋白表达。

结论：成功克隆出该家系致病基因wGJA8和mGJA8，完成了致病基因在真核细胞中的蛋白表达，为进一步研究该家系白内障的确切发病机制奠定了基础。