2.2  MVD记数

    结果显示，在CNV形成中，MVD数量逐渐增加，以CNV 7 d组MVD数最多，此后逐渐减少(见表1)。表1大鼠角膜碱烧伤后不同阶段角膜中MVD记数

    2.3  免疫组化检测VEGF的表达

    免疫组化检测显示：对照组大鼠角膜组织结构正常，可见角膜上皮层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮层排列整齐，VEGF 在角膜中均有阳性表达，碱烧伤后1天，角膜上皮受损，角膜缘血管网可见炎性细胞增多，在这些炎性细胞周围，VEGF呈弱阳性表达，整个过程中，VEGF表达缓慢增高，从角膜缘至角膜中央的VEGF表达逐渐增加；到7～14天时VEGF分布于整个血管化的角膜，这些表达亦位于炎性细胞周围；21天后，VEGF在萎缩的角膜表达很弱（见表2）。表2大鼠角膜碱烧伤不同阶段角膜中VEGF 的平均光密度 (

    2.4  图像分析结果

    免疫组化计算机图像分析检VEGF阳性细胞的平均光密度，其各时段均值变化情况见表2, CNV中VEGF与MVD的关系见表3。表3MVD与CNV中VEGF 的关系

    3  讨论

    目前研究表明，现已纯化出的许多多肽类因子，均与新生血管的生长有关。其中VEGF是惟一作用于血管内皮细胞的生长因子，有很强的促进血管内皮细胞分裂、增殖、迁移和增强血管通透性的作用，并且VEGF受体广泛存在于血管内皮细胞中。因此，VEGF作为与病理过程相关的内源性血管生成因子，对角膜新生血管的生成有促进作用。正常角膜中，VEGF在上皮、内皮以及角膜缘血管内皮细胞上均有表达，其受体flt-1和flk-1在角膜缘血管内皮细胞上有表达［2］。在多种原因引起的角膜新生血管中，VEGF mRNA及其蛋白在浸润的白细胞、新生血管内皮细胞上表达明显升高［3, 4］。VEGF的作用在于它可以刺激内皮细胞分泌蛋白酶和蛋白酶原活化因子，从而导致血管基底膜的降解，细胞得以侵入周围基质，迁移，增生，最终分化成一个新的、含有一个空腔的血管［5］。腾旭等［6］研究发现，VEGF mRNA水平的升高、下降和角膜新生血管的面积变化是相对应的，但峰值提前48 h，而我们在该研究中发现，大鼠角膜碱烧伤后，VEGF的表达增加较新生血管的出现早24 h。Amano等［7］发现在鼠角膜新生血管模型中VEGF mRNA及其蛋白水平增高，证实VEGF是一个有效的内源性角膜血管因子。而且，VEGF是新确定的一种具有特异性可促进血管内皮细胞分裂、在新生血管的形成过程中发挥中心作用的因子［8］。Cursiefen等［9］对2557个扣状角膜的病理研究发现，导致血管化瘢痕的全部角膜均呈现VEGF免疫组化染色阳性。据此认为，VEGF与病理性的角膜血管形成有关。

    本实验中，在角膜新生血管形成的早期阶段，VEGF在角膜缘区表达增加，此后与新生血管的形成相一致，VEGF的表达逐渐增加并朝向角膜中央，且VEGF表达位于炎性细胞浸润的部位，表明VEGF的表达与炎性细胞关系密切。 Edelman等［3］在相同的动物模型中证实化学烧伤后角膜VEGF的主要来源是从角膜缘侵入角膜基质层的白细胞，本实验中也观察到同样结果。由此，进一步证实了VEGF对血管内皮细胞有特异的促有丝分裂作用，是有效的内源性角膜血管生长因子，VEGF在角膜碱烧伤后新生血管形成中起着关键作用。

    本实验中，MVD与VEGF 的表达呈正相关，其相关系数为r =0.999, P=0.000 (P<0.01)，表明在角膜新生血管形成中随着MVD的增加，VEGF的表达也逐渐增强。Kurizaki T等［10］通过分析研究VEGF和MVD的表达情况，认为MVD与VEGF的表达有相关性。因此，有针对性地干预碱烧伤后角膜组织VEGF的表达，就可以有效抑制新生血管的生长，尤其是碱烧伤后前7d及时有效的干预更为重要。另外，我们也发现，VEGF也表达在正常角膜组织的上皮及内皮细胞中，据此研究者推测，VEGF除目前已知的功能外，可能还有参与维持正常角膜组织生理功能和角膜损伤愈合功能［11］。在治疗角膜新生血管化时，不能完全抑制VEGF。

    总之，碱烧伤后鼠角膜VEGF的表达水平与新生血管的形成有明显的相关性，并在其中发挥了重要作用。靶向VEGF的干预治疗应该是今后眼部新生血管性疾病治疗的主要选择途径之一。

   【参考文献】

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    ［4］ Ander Kvata. Expression of Matrix Metalloproteinase-2 and Vascular Endothelial Growth Factor in inflammation-associated corneal neovascularization ［J］.Exp Eye Res,2000,(70):419-428

    ［5］ 何有娣. FGF和 VEGF在血管生成中的作用［J］.国外医学·药学分册, 2001, 28（6）: 326-329

    ［6］ 腾旭, 孙旭光, 王智群. 大鼠角膜烧伤后新生血管基因治疗的研究［J］.眼科研究.2002, 20（5）: 416-418

    ［7］ Amano S, Rohan R,Kuroki M,et al.Requirment for vascular endothelial growth factor in wound and inflammation-related corneal neovascularization［J］.IOVS,1998,39（5）:18-22

    ［8］ 杨艳, 张明昌, 张波. 血管内皮生长因子及其受体在大鼠角膜碱烧伤后角膜新生血管的表达［J］.国际眼科杂志,2006 , 6 (6) :1320-1322

    ［9］ Cursiefen C,Hofmann-Rummelt C,Kuchle M,et al.VEGF-immunoactivity in human corneal buttons with neovascularization［J］.IOVS,1998,39（9）:3418-3444

    ［10］ Kurizaki T,Toi M,Tominaga T.Relationship between matrix metalloproteinase expression and tumor angiogenesis in human breast carcinoma ［J］.Oncol Rep,1998,5(3):673-677

    ［11］ 陈家祺, 刘文, 刘祖国, 等. 血管内皮生长因子及其受体在病变角膜的表达和临床意义的探讨［J］.眼科学报, 2002, 18（4）:203 -207

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