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2 结果
本实验的酶谱结果中可以看到3条带。分别位于相对分子质量为92×103，72×103，68×103处，相应的明胶酶是92×103-明胶酶(MMP-9），72×103-明胶酶(MMP-2)和MMP-2的活性形式。
光密度扫描结果见表1和表2。
根据酶谱法结果和光密度扫描值可以发现(表1，2)：TGF-β可以抑制MMP-9的活性，但对MMP-2的活性则有刺激作用。0．1ng／ml的TGF-β即可明显地抑制MMP-9的活性(约65%)，1ng／ml的 TGF-β对MMP-9活性的抑制作用更为明显（约86%），而在5ng/ml TGF-β作用的样本中，已经看不到蛋白分解带，MMP-9的活性几乎已完全被抑制。TGF-β对MMP-9活性的抑制作用随时间的延长而增强，1ng／mlTGF-β作用1天后，MMP-9的活性约37%被抑制，两天后，87%的活性被抑制，3天后则看不到蛋白分解带，MMP-9的活性几乎完全被抑制。
表1 不同质量浓度TGF-β作用后MMP-2，MMP-9的光密度分析
Tab．1 Densitometric analysis of MMP-2 and
MMP-9 after different dose TGF-β treatment
| Concentration of TGF-β
(ng/ml) |
Densitometric value（Au．mm2) |
| 92×103 |
72×103 |
68×103 |
| 0（control） |
0．29 |
0．46 |
0．26 |
| 0．1 |
0．10 |
0．55 |
0．42 |
| 1 |
0．04 |
0．60 |
0．48 |
| 5 |
|
0．49 |
0．45 |
表2 TGF-β作用不同时间后MMP-2，MMP-9的光密度分析
Tab．2 Densitometric analysis of MMP-2 and MMP-9
after TGF-β treatment at different time
| Time |
92×103 Densitometric |
72×103 Densitometric |
68×103 Densitometric |
| （h） |
value（Au．mm2） |
value（Au．mm2） |
value（Au．mm2） |
| |
control |
TGF-β |
control |
TGF-β |
control |
TGF-β |
| 24 |
0．81 |
0．51 |
0．79 |
0．86 |
0．22 |
0．39 |
| 48 |
0．90 |
0．11 |
0．89 |
1．07 |
0．29 |
0．52 |
| 72 |
0．81 |
|
0．87 |
0．92 |
0．31 |
0．54 |
对于MMP-2，TGF-β的作用则不同。TGF-β对相对分子质量为72×103 MMP-2的前酶形式和相对分子质量为68×103的活性形式均有一定的刺激作用。各质量浓度TGF-β对MMP-2的刺激作用差别不太明显，对72×103 MMP-2的刺激作用为1．06～1．3倍，1ng／ml的TGF-β作用最明显，可使MMP-2的活性增强1．3倍。我们检测了TGF-β在不同时间对MMP-2的作用发现，第2天时，TGF-β对MMP-2的刺激作用最高，第1天和第3天时仅分别使MMP-2的活性增强至1．06和1．08倍。相对于72×103 MMP-2的前酶形式而言，TGF-β对68×103MMP-2的活性形式的刺激作用要强一些，各质量浓度TGF-β对其刺激作用仍以1ng／ml的TGF-β最为明显(1．84倍)，但与其他质量浓度的作用差别不太明显，各时间点1ng／ml的TGF-β对MMP-2活性形式的作用几乎无变化，为1．74～1．79倍。
在抑制实验中，显色缓冲液中加入了EDTA，EDTA是一种钙离子螯合剂，能够阻断钙离子的作用，结果凝胶中见不到蛋白分解带，MMP-2，MMP-9的活性完全被抑制。因为MMP是一种钙离子依赖的蛋白分解酶，本抑制实验从另一方面证明了实验中所见到的确系MMP的作用。
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