作者：杨成明 胡一多 苏冠方 张丽华 刘早霞    作者单位：吉林大学第二医院眼科，吉林 长春 130041

　　【摘要】  目的 研究微量全氟菲烷眼底残留对兔视网膜电图及超微结构的影响。方法 取成年健康大耳灰兔24只，随机将每只兔的一眼为实验眼,另一眼为对照眼。将试验眼再随机分为视网膜表面组及视网膜下组。兔眼麻醉后外上方角巩膜缘后3 mm处穿刺,赤道部视网膜上造孔后向视网膜下推注0.1 ml全氟菲烷，此为视网膜下组。对于视网膜表面组则不造孔，仅将全氟菲烷注射到视网膜表面。术后定期行检验镜及视网膜电图(ERG)检查后处死并摘除眼球,固定，超薄切片，透射电镜下观察兔视网膜超微结构的改变。结果 检眼镜检查：视网膜未见明显变化；视网膜电图检查：视网膜表面组及视网膜下组与对照组相比，视网膜电图均发生明显变化。透射电镜下观察：实验组除第1天外，其他各时间段视网膜各层细胞显微结构均出现损害。且随着时间的推移，全氟菲烷的损害作用不断加重，且视网膜下组比视网膜表面组损害更重。 结论 微量全氟菲烷残留眼底可对视网膜结构造成损害，且其主要原因还是重水的机械压迫作用，而重水的毒性作用亦不可忽视。

　　【关键词】  全氟菲烷；视网膜电图；电镜

　　全氟化碳液（PFCLS），又名重水，是玻璃体视网膜手术中重要的玻璃体替代物，迄今为止，在已有的多种玻璃体替代物中，由于其高比重，不溶于水的特性，在眼科的外科手术中得到了广泛的应用，成为玻璃体短期或中期的替代物和内眼流动性组织的工具〔1，2〕。但是，重水的眼内残留仍然是一种严重的手术并发症。很多研究发现，它滞留眼内一段时间对眼组织有一定的毒性，但到目前为止，PFCLS作为玻璃体填充物引起视网膜发生病理性改变的确切原因尚不清楚，且有关微量重水残留对眼组织影响的报道很少。本研究旨在揭示重水对眼底组织的影响，探讨眼底改变的发病机制，为临床应用提供实验根据。

　　1  材料与方法

　　1.1  材料  全氟菲烷购自上海博士伦公司；灰兔购自吉林大学动物室。

　　1.2  重水残留模型的建立  取成年健康大耳灰兔24只,雌雄兼用,体重2.0～2.5 kg。随机将每只兔的一眼为实验眼,另一眼为对照眼。将实验眼再随机分为视网膜表面组（12只）及视网膜下组（12只）,以速眠新0.1 ml/kg肌肉注射麻醉后，缝线固定上直肌,于颞上象限剪开球结膜,在外上方角巩膜缘后3 mm处,用20 Ｇ巩膜穿刺刀刺穿巩膜,显微镜下,伸入27 Ｇ前房注射针。在髓线（为兔眼的视盘，呈横椭圆形）下方约1～2 PD处赤道部视网膜上造一小孔,视网膜下缓慢推注0.1 ml的全氟菲烷,可见局部视网膜灰白色隆起，此为视网膜下组；视网膜表面组则在玻璃体临近髓线处视网膜表面注入0.1 ml全氟菲烷;而对照组不做任何处理。用8-0可吸收缝线缝合结膜切口1针,结膜下注射庆大霉素1万单位。术后将兔放入带有头部固定圈的木箱中（防止重水在眼内运动），每日用氯霉素眼液冲洗术眼，金霉素眼膏涂术眼。术后每日用直接检眼镜检查所有灰兔眼底。分别在术后1、3、7、14 d及1、3个月对4只灰兔（包括视网膜表面组和视网膜下组各2只）行闪光视网膜电图(ERG)检查,然后即刻处死摘除眼球,固定用于组织学检查。

　　1.3  电镜切片的制备  取实验组眼全氟菲烷附近的网膜组织（摘除前已作标记）固定于眼球固定液(2.5%戊二醛前固定，1%锇酸后固定)。经酒精系列脱水后,Epon812环氧树脂包埋,LKB-3型超薄切片机做超薄切片,醋酸双氧铀及柠檬酸铅双重染色，JEM-1200EX型透射电子显微镜观察摄片。

　　1.4  ERG检查  同样方法全身麻醉后,结膜囊内滴1%的倍诺喜眼液进行表面麻醉。结膜囊和角膜接触镜电极内滴入0.5%甲基纤维素溶液后,安放角膜接触镜电极,参考电极用不锈钢针刺入耳根和眼睑之间皮下,接地电极用不锈钢针刺入额部正中皮下。采用全视野弥散光,标准强度白光单次闪光刺激,每只眼记录3次。记录兔眼暗适应视网膜电图ｂ波的潜伏期(Ｌｂ)、振幅(Ａｂ)。采用重庆泰克公司生产的电生理记录仪,频带5～1 000 Hz,分析时间200 ms,白色闪光刺激仪,强度为3.32 J,频率1 Hz,叠加3次。

　　2  结果

　　2.1  检眼镜下所见  所有术眼均未出现眼内炎。除1例视网膜下组兔眼由于晶体混浊影响眼底观察外，其余均可用直接检眼镜观察眼底变化。其中对照组玻璃体透明，视网膜呈橘红色反光；视网膜表面组可见全氟菲烷在玻璃体腔内4 w即有乳化和分散成为小滴(鱼卵现象) ，视网膜未见任何明显变化。视网膜下组可见全氟菲烷注射部位局部隆起，余未见明显变化。

　　2.2  ERG检查  实验组中视网膜表面组ｂ波的振幅和对照组相比在7 d后有显著性差异,但潜伏期无显著性差异；同样，视网膜下组ｂ波的振幅和对照组相比在7 d后有显著性差异,但潜伏期亦无显著性差异；而视网膜表面组实验眼ｂ波的潜伏期、振幅和视网膜下组相比无显著性差异（见图1）。

　　2.3  透射电镜下观察

　　2.3.1  视网膜下组术后3 d就出现感光细胞外节盘膜不规则缺损，即“虫咬现象”；7 d时光感受器核减少或移到锥杆细胞层,视网膜色素上皮萎缩、视网膜外核层变薄、视神经和视网膜表面神经胶质增生，细胞器核内染色质凝聚，核仁明显，核周间隙增宽；在术后14 d不同程度地出现光感受器内节膜盘融合，排列紊乱，内节细胞基质空化，线粒体呈凝固状；1月后，全氟菲烷聚集的下方视网膜各层均变薄并伴有细胞数量减少,视网膜萎缩、结构破坏。其中内核层和神经节细胞层出现细胞空泡化损害。内节中线粒体肿胀，嵴断裂，粗面内质网扩张增多，视细胞顶部胞质可见小空泡结构，可见髓样小体，内核层的双极细胞可见空泡结构，周围轴突内可见髓样小体，色素上皮细胞顶部可见微绒毛减少，细胞内色素颗粒增加，可见大颗粒吞噬膜盘及脂滴；3个月后,视网膜各层进一步萎缩、变薄，双极细胞及节细胞内空泡进一步增多，视细胞内见电子密度高的颗粒（为吞噬的重水小滴），甚至出现细胞器外溢现象（见图2）。

　　A视网膜表面组和对照组对比；B视网膜下组和对照组的对比；C视网膜表面组和视网膜下组对比

　　图1  ERG检查结果（略）

　　A虫咬现象；B核周间隙增宽；C线粒体呈凝固状；D大颗粒吞噬膜盘及脂滴；E细胞器外溢

　　图2  视网膜下组的电镜结果(×20 000)（略）

　　A泡沫细胞；B微绒毛减少；C核内染色质凝聚；D膜盘数量明显减少

　　图3  视网膜表面组的电镜结果(×20 000)（略）

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