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2.3 内核层（inner nuclear layer，INL）染色 再灌注6 h组可见INL细胞开始出现阳性染色，随着再灌注时间延长，阳性染色细胞逐渐增多，至再灌注24 h达到高峰，INL层的内侧染色相对明显，48 h再灌注时，TUNEL标记明显减少，再灌注72 h完全消失。TUNEL阳性的GCL和INL细胞定量分析结果见图3。
图3 再灌注不同时相TUNEL阳性细胞计数（略）
3 讨论
原位凋亡检测方法应用的TUNEL技术，对凋亡细胞的标记强度高，敏感性强。本研究报道了TUNEL方法检测的实验性大鼠视网膜IR损伤视网膜内层细胞的凋亡现象。在中枢神经系统中，缺血、缺氧等引起的神经元细胞的死亡起初被认为是坏死，但是最近的一些研究表明凋亡在IR损伤中也起重要作用，瞬时脑IR损伤和局灶性脑缺血的研究发现凋亡参与脑神经元的死亡〔4，5〕。在内层视网膜上可以见到TUNEL阳性的GCL和INL细胞，是神经元细胞的凋亡和变性，而不是血管内皮细胞，表明在视网膜IR损伤过程中存在神经元凋亡，这一现象与其他文献报道相似〔6〕。这些数据表明在视网膜IR早期就有神经元凋亡，神经元变性可以看成是视网膜IR的重要结果，这一结果也支持Gibson〔7〕提出的凋亡在神经元变性中起重要作用这一学说。临床上所观察到的视网膜循环障碍性疾病后期出现的视神经萎缩的现象与此相吻合。同样，视网膜局部变薄，或视网膜神经纤维层缺损也可以在一些视网膜反复缺血的疾病中见到。
视网膜细胞凋亡首先出现在GCL层，随后在INL层出现，其中INL层细胞包括双极细胞的胞体，水平细胞，无长突细胞和神经胶质细胞。一方面说明视网膜节细胞对缺血和缺氧的反应最敏感，此过程使神经元的破坏增多，导致视网膜视觉冲动传导过程的第一级和第二级神经元受损；另一方面，也可能存在视网膜神经胶质细胞的凋亡。胶质细胞能诱导大脑中起屏障作用的蛋白质的产生，在视网膜上能够诱使视网膜血管内皮细胞表达紧密连接蛋白〔8〕，因此神经胶质细胞的死亡将导致血管内皮细胞的屏障功能下降，加重视网膜微血管病变。
视网膜细胞凋亡自再灌注3 h后出现，逐渐增多，一直持续存在至24 h，然后下降，至48 h减少，至72 h则完全观察不到。由于IR，导致视网膜细胞凋亡的发生，同时由于继发的毒性因素的释放可能加速细胞凋亡。一些研究〔2〕已经证实视网膜IR损伤过程中有谷氨酸代谢的改变，大量未代谢的谷氨酸所引起的毒性反应能够进一步导致神经细胞凋亡；同时，细胞外大量谷氨酸的堆积也说明神经胶质细胞的保护功能下降。
因此，视网膜IR损伤引起的疾病的病理过程不仅仅是循环障碍，更是视网膜神经的变性。对这些疾病的治疗应至少包含针对恢复神经变性和改善循环障碍两个方面来进行。
【参考文献】
1 Muir KW，Buchan A，von Kummer R,et al.Imaging of acute stroke〔J〕. Lancet Neurol，2006;5 (9):75568.
2 Osborne NN，Casson RJ，Wood JP,et al.Retinal ischemia：mechanisms of damage and potential therapeutic strategies〔J〕.Prog Retin Eye Res，2004;23(1):91147.
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4 Smrcka M，Horky M，Otevrel F,et al.The onset of apoptosis of neurons induced by ischemiareperfusion injury is delayed by transient period of hypertension in rats〔J〕.Physiol Res，2003;52(1):11722.
5 Mouw G，Zechel JL，Zhou Y,et al.Caspase9 inhibition after focal cerebral ischemia improves outcome following reversible focal ischemia〔J〕. Metab Brain Dis，2002;17(3):14351.
6 Zhou Y，Lindner LE，Chiou GC,et al.Transient retinal ischemiareperfusion in rats〔J〕.Chin Med J (Engl)，2000;113：4615.
7 Gibson RM.Does apoptosis have a role in neurodegeneration〔J〕?BMJ，2001;322:153940.
8 Gardner TW,Lieth E,Khin SA,et al.Astrocytes increase barrier properties and ZO1 expression in retinal vascular endothelial cells〔J〕.Invest Ophthalmol Vis Sci，1997；38:24237. 上一页 [1] [2] |
