作者:马义宾,刘艳娣 作者单位:(1.泰山医学院附属泰安医院眼科医院,山东 泰安 271000; 2.莱阳农学院校医院,山东 莱阳 265200)
【摘要】 目的 研究20%乙醇不同浸润时间,对兔角膜上皮细胞活性的影响,为LASEK术中选择适宜的乙醇浸润时间提供理论依据。方法 10只实验兔按每组2只随机分为5组:正常对照组、20S组、30S组、40S组、50S组,实验组分别行20%乙醇浸润20 s、30 s、40 s、50 s。角膜标本分别行酶组织化学染色观察。结果 与正常对照组相比,20%乙醇浸润兔角膜上皮细胞20 s、30 s,细胞活性无明显降低(P>0.05);浸润时间一旦达到或超过40 s,细胞活性明显降低(P<0.001)。结论 LASEK术中20%乙醇的最适浸润时间以不超过30 s为宜。
【关键词】 准分子激光上皮瓣下角膜磨镶术;乙醇;代谢;活性
Experimental Study on the Vitality of Corneal Epithelieum after Exposed
to 20% Alcohol for Different TimeMA Yi-bin,LIU Yan-di
(1. Eye Hospital of Taian Central Hospital,Taian 271000,China; 2. Laiyang Agricultural College;Taian 265200,China)
Abstract:Objective To evaluate the vitality of corneal epithelieum after exposed to 20% alcoholic solution for different time. Methods: According to the time of rabbits sacrifice,10 healthy adult New Zealand white rabbits were devided into 5 groups randomly.They were fresh control group, 20S group,30S group,40S group and 50S group . In experimental groups the eyes were exposed to 20% alcoholic solution for 20s,30s,40s or 50s. Enzyme histochemistry methods with VIDAS image analysis system were used to evaluate the metabolic enzyme activities,lactate dehydrogenase (LDH) and succinate dehydrogenase (SDH). Results:Contrast with the fresh control group ,the corneal epithelial cells which were infiltrated by 20% alcohol for 20s or 30s,remained satisfactory vitality,(P>0.05);While those were infiltrated for 40sor 50s, had been weakened deeply,(P<0.001).Conclusion: The density of alcoholic solution and the time to be exposed for were very important to laser epithelial keratomileusis(LASEK).20% alcoholic solution last not more than 30 seconds will be more successful.
Key words:laser epithelial keratomileusis; metabolism; alcohol; vitality
准分子激光上皮瓣下角膜磨镶术(laser epithelial keratomileusis,LASEK)治疗屈光不正在临床上已经取得了良好的效果。有关LASEK的临床报道中乙醇的浓度多统一于20%左右,而乙醇的具体浸润时间却为20 s、30 s、40 s、50 s不等。本研究采用20%的乙醇作为最适乙醇浓度,浸润时间选择为20 s、30 s、40 s、50 s,通过研究兔角膜上皮细胞活性的变化,寻求最佳作用时间,为LASEK术中选择乙醇的最适宜浸润时间提供理论依据。
1 材料和方法
1.1 材料
健康的成年新西兰大耳白兔10只(20眼),体重2000 g~2500 g,无眼部疾患,雌雄均用。按照乙醇浸润时间随机分为20S组、30S组、40S组、50S组和正常对照组,每组2只(4眼)。实验组分别行20%乙醇浸润角膜上皮细胞20 s、30 s、40 s、50 s。实验动物购自泰安市药检所动物实验中心,由本院动物实验室饲养。
1.2 方法
1.2.1手术方法 术前用0.3%的氧氟沙星滴眼液点兔眼,每小时1次,共计6次。3%的戊巴比妥溶液1 ml/kg自兔耳缘静脉注入,全麻后乙醇消毒铺巾,BSS冲洗结膜囊。0.4%倍诺喜表面麻醉2次。以瞳孔为中心将内径9 mm的角膜上皮环钻固定于角膜上,将新鲜配制的20%的乙醇溶液(1 ml纯度为99.7%的无水乙醇中加入4.0 ml注射用蒸馏水)0.15 ml置于上皮环钻内,计时20 s、30 s、40 s、50 s不等,吸血海棉吸干乙醇,BSS充分冲洗。空气栓塞法处死实验兔,BSS冲洗结膜囊,8.5 mm直径角膜环钻以瞳孔为中心全层钻通角膜制取角膜标本备用。
1.2.2 乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)的酶组织化学染色测定 离体角膜标本要低温保存,30 min之内行OCT(冷冻包埋剂)包埋。6 h内在CRYOCUT1800型恒低温切片机中制成10 mm的冰冻切片,继之完成染色。每份角膜标本切片6张,每种酶3张(其中一张为阴性对照)。染色后当天完成光密度测定,尽可能减少酶活性的降低。
1.2.3 LDH的酶组织化学染色过程(底物为乳酸钠) 新鲜冰冻切片于37 ℃孵育液中孵育30~60 min, 丙酮去粉红色甲臜, 蒸馏水洗5 min, 15%福尔马林盐水15 min, 蒸馏水洗5 min, mayer复染, 流水冲洗5 min, 蒸馏水洗3 min, 脱水, 二甲苯透明, 中性树脂封片。
1.2.4 SDH的酶组织化学染色过程(底物为琥珀酸钠):新鲜冰冻切片于37 ℃孵育液中孵育20 min, 蒸馏水洗净(必要时2%甲绿复染核), 甘油明胶封片。
1.2.5 对照方法为去底物法,来源于Lojda[1]。
1.2.6 酶组织化学染色完成2 h内,应用图象分析系统(VIDAS-21软件)随机测量角膜上皮层的光密度值(OD),取其平均值,进行统计学分析。
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