作者：陈婴,盛敏杰    作者单位：上海同济大学附属第十人民医院 眼科,上海 200072

    【摘要】  目的 探讨角膜保存方法及保存角膜内皮细胞的超微结构变化。方法 取新鲜眼球经消毒处理后,抽空房水,前房注入optisol、likorol角膜保存液或C3F8惰性气体,全眼球置于保存液中,4℃冰箱保存。分别取保存3～7d的角膜5例（保存组）,通过电子显微镜观察角膜内皮细胞的细胞膜、细胞核及线粒体结构,应用角膜内皮机检测角膜内皮细胞密度及六边形细胞比率,并与3d内保存的新鲜角膜对照（对照组）。结果 保存组与对照组角膜内皮细胞的细胞膜、细胞核、线粒体之结构变化无明显差异；两组角膜内皮细胞密度及六边形细胞比率差异也无统计学意义（均P>0.05）。结论 在optisol、likorol角膜保护液和C3F8气体中长期保存的角膜与新鲜角膜无明显差异。

    【关键词】  角膜；中长期保存；内皮细胞；超微结构

    角膜病为眼科常见病、多发病,是致盲的主要原因。角膜移植术是重要的复明方法之一，而角膜移植成功与否主要取决于角膜内皮细胞的数量和生物活性。目前角膜移植手术均使用湿房保存3d以内的新鲜角膜,也有报道使用甘油保存角膜（仅适用于板层角膜移植），但以上方法长期保存>3d的角膜其内皮细胞活性较差,术后达不到预期的复明效果；并且以上方法角膜保存时间短（<72h）,因此，偏远地区患者不能及时得到治疗而造成终身残疾。近年来有报道采用深低温保存的角膜行穿透角膜移植术，并取得了满意的视觉效果,但有关保存角膜的超微结构变化未见报道。现将使用optisol、likorol角膜保护液或C3F8气体中长期（3～7d）保存的角膜内皮细胞超微结构及其数量及形态变化情况报道如下。

    1  资料与方法

    1.1  研究对象

    取新鲜眼球经消毒处理后,抽空房水,前房注入optisol、likorol角膜保存液或C3F8气体至正常深度,全眼球置于保存液中,4℃冰箱保存。选择保存3～7d的保存角膜（保存组）5例进行观察。对照组5例,采用常规4℃冰箱保存3d以内的新鲜角膜。保存组角膜与对照组角膜均来自于同一条件下获得的眼球（捐献者均为男性,年龄20～35岁,于死亡10min内取出的眼球,均于眼球离体后1h测角膜内皮细胞数并取同一角膜送电子显微镜观察）。

    1.2  检测方法

    通过透射电镜及扫描电镜观察保存组及对照组角膜内皮细胞的细胞膜、细胞核及线粒体结构,并将两组作比较。用日本KONAN非接触式角膜内皮机分别检测保存组角膜在保存前和保存后的内皮细胞数量和形态,并与对照组作比较。以裂隙灯检查两组角膜的透明度。

    1.3  统计学处理

    数据以x-±s表示，结果采用配对t检验。

    2  结    果

    2.1  电镜检查

    透射电镜观察结果显示,对照组的角膜内皮细胞的细胞膜完整,细胞连接紧密，核固缩,线粒体肿胀（见图1）；保存组角膜内皮细胞肿胀、核固缩、线粒体

    内皮细胞连接紧密,核固缩少许,线粒体肿胀  ×3500

    图1  对照组透射电镜图像

    肿胀，且随着保存时间的延长逐渐明显,但内皮细胞膜仍然完整,与后弹力层连接紧密（见图2）；也有部分细胞破裂,核脱落,胞浆流失。

    内皮细胞膜完整,核固缩少许,线粒体肿胀，与后弹力层连接紧密  ×5000

    图2  保存组透射电镜图像

    扫描电镜观察结果显示,保存组角膜内皮细胞排列整齐，随着时间延长,可见表面脱落坏死细胞,间隙见有活性细胞（见图3、4）。

    角膜形态规则,排列整齐,大小均匀,无空缺  ×1000

    图3  保存组扫描电镜图像

    细胞部分坏死脱落  ×500

    图4  保存组扫描电镜图像

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