作者：于安星，周东风 作者单位：青岛大学医学院附属青岛市市立医院普外科,山东 青岛 266021
【摘要】 目的 探讨重组内皮抑素对碱烧伤诱导兔角膜新生血管（CNV）的抑制作用。方法新西兰大白兔20 只,随机分为两组,每组10只。采用碱烧伤法制备兔CNV 模型后，实验组球结膜下注射重组人内皮抑素0.05 mL,对照组球结膜下注射生理盐水0.05 mL，均隔日1 次，共注射19 d。每日裂隙灯显微镜下观察并测量自角膜缘长出的CNV长度和数量,并摄影，输入计算机经图像分析系统计算CNV面积。术后19 d处死动物，取角膜， CD34染色，显微镜下检测微血管密度（MVD）。结果实验组第7、14、19天CNV面积及MVD明显少于对照组,差异有显著性(t=4.191～8.003,P<0.01)。结论 重组内皮抑素可有效抑制CNV生长，为临床防治CNV 提供了一种新的方法。
【关键词】 内皮抑素类；角膜新生血管化；烧伤，化学；兔
EFFECT OF RECOMBINANT ENDOSTATIN ON CORNEAL NEOVASCULARIZATION INDUCED BY ALKALI BURN YU ANXING, ZHOU DONGFENG (Department of Surgery, The Affiliated Hospital of Qingdao Municipal Hospital, Qingdao University Medical College, Qingdao 266021, China) ; ［ABSTRACT］ Objective To explore the inhibitory action of recombinant endostatin on corneal neovascularization (CNV) in rabbit caused by alkali burn. Methods Twenty New Zealand white rabbits were equally divided into two groups. Alkali burn was used to prepare a neovascularization model and recombinant human endostatin (0.05 mL) was injected into subconjunctival tissue of the rabbits in experiment group and normal saline (0.05 mL) was injected into same tissue in control group, once every other day for 19 days. Slitlamp microscopic observation was done daily, the number and the length of CNV erupted from limbus of cornea were determined and photographed, which were transmitted to computer and the area of CNV was calculated through imageanalysis. The animals were killed 19 days after the procedure, the cornea collected and CD34 stain done. The microvessel quantity (MVD) was counted microscopically. Results The experiment group showed smaller CNV area on day 7, 14, and 19 and lower MVD than the control, the difference was significant (t=4.191-8.003,P<0.01). Conclusion Recombinant endostain can effectively inhibit the growth of CNV, which provides a new method for the prevention and treatment of this condition.
［KEY WORDS］ Endostatin; Corneal neovascularization; Burn, chemical; Rabbits
内皮抑素是1997年由O’RELLY[1]等分离纯化获得的一种血管内皮细胞的强效抑制剂，能特异性抑制已经被激活的血管内皮细胞的增殖,阻断新生血管的生成。本文观察内皮抑素抑制兔眼角膜新生血管（CNV）形成的效果，为其用于治疗眼部新生血管性疾病及肿瘤奠定基础，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 实验材料
实验动物为健康新西兰大白兔20只,雄兔11只，雌兔9只,体质量2.0～2. 5 kg,眼裂隙灯显微镜检查无眼病，青岛大学医学院实验动物中心提供。重组内皮抑素由我院中心实验室克隆和表达[2]，纯度92%, 用生理盐水稀释制成50 mg／L的溶液。所用仪器有：裂隙灯显微镜，数码照相机，计算机图像分析系统，眼科显微手术器材，CD34及免疫组化检测试剂盒（购自北京中山生物技术有限公司）。
1.2 实验方法
将20只大白兔随机分为实验组和对照组,每组10只(双眼)，均用苯巴比妥（30 mg／kg）自耳缘静脉注射行全麻,5 g/L丁卡因术前点眼行角膜局麻,在无菌条件下,用统一规格（直径3.0 mm）单层圆形滤纸浸入1 mol/L氢氧化钠溶液1 min, 达到饱和状态后取出，甩干多余液体,贴敷于角膜中央50 s,取下,立即用50 mL生理盐水冲洗角膜及结膜囊,回笼后正常饲养。角膜碱烧伤后第1天起，实验组球结膜下注射重组人内皮抑素0.05 mL,对照组球结膜下注射生理盐水0.05 mL，均隔日1次，共19 d。
每天滴氯霉素滴眼液（润舒）6 次，夜晚涂红霉素眼膏1次。
1.3 CNV检测
每日裂隙灯显微镜下（放大8倍）观察，测量自角膜缘长出的CNV长度和数量,并摄影，输入计算机经图像分析系统计算CNV 面积（A）[3]。
1.4 微血管密度（MVD）检测
碱烧伤后第19天，各组兔子均用空气栓塞法处死,取角膜，石蜡包埋、切片，行苏木精伊红染色及CD34免疫组化染色。CD34染色以血管内皮细胞胞浆及胞膜出现棕黄色颗粒为阳性判断标准。在低倍镜下（100倍）选取角膜血管内皮细胞染色清晰，背景对照良好的5个视野，然后在高倍镜下（400倍）计数所有染色的微血管数，取其平均值作为该切片的MVD。
1.5 统计学处理
采用SPSS 13.0统计分析软件进行数据处理, 结果以±s表示,数据间比较采用t检验。
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