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2结果
2.1角膜新生血管生长
角膜碱烧伤后1d，角膜缘血管充血，角膜上皮脱落，烧伤区周围可见角膜雾状混浊；(2.78±0.44)d裂隙灯下可见角巩膜缘新生血管芽生成，新生血管开始侵入角膜缘内，烧伤区周围可见角膜轻度水肿和混浊；3d可见新生血管侵入透明角膜，长度为0.5～1.0mm，随时间推移，角膜水肿逐渐减轻；4d后新生血管侵入角巩膜缘内1.0mm，此后新生血管生长迅速，15.11±1.45d时新生血管达角膜中央(图1)。
2.2角膜植片存活情况
A组兔角膜18.88±1.46d时植片与植床交界处可见少量新生血管，至观察末未发生排斥反应(图2)；B组兔角膜14.13±0.83d时新生血管侵入移植片，植片存活时间为25.13±0.64d(图3)；C组兔角膜24.25±1.04d时植片与植床交界处可见新生血管，至观察末未发生排斥反应(图4)；D组兔角膜15.50±0.93d时新生血管侵入移植片,植片存活时间为38.25±1.28d(图5)。应用单因素方差分析，同种异体移植各组间差异有统计学意义（F=136.88，P=0.00），用LSDt检验进行组间两两比较，各组间差异均有统计学意义（P＜0.05，表1）。
2.3组织病理学检查
碱烧伤角膜部分角膜上皮己缺失，形成溃疡。角膜中央烧伤区基质层水肿增厚，以上皮侧为重，胶原纤维排列疏松，中间有大量空泡和少量新生血管，并有大量炎性细胞浸润。内弹力层仍存在，内皮细胞脱落（图6）。碱烧伤常规角膜移植组角膜植片均发生排斥反应，角膜切片显示整个角膜水肿增厚，基质层均匀增厚，胶原纤维排列紊乱，伴有新生血管形成和大量炎性细胞浸润。炎性细胞从角巩膜缘向植片方向移行，以缝线处和植床植片交界处最多，向角膜中央逐渐过渡。内弹力层仍存在，内皮细胞己脱落（图7）。碱烧伤后诱导ACAID的角膜移植组角膜植片水肿增厚，基质层均匀增厚，胶原纤维排列紊乱，内弹力层存在，内皮细胞多己脱落。角膜基质层中炎性细胞和新生血管较少，仅在缝线处有大量炎性细胞浸润（图8）。正常角膜常规角膜移植组与正常角膜诱导ACAID的角膜移植组角膜植片厚度基本正常，无明显水肿，胶原纤维排列整齐，仅在缝线处有炎性细胞浸润，新生血管较少，内弹力层存在，部分内皮消失（图9）。
3讨论
随着眼科显微手术和缝线技术的发展，因手术创伤所造成的角膜移植失败已大大降低，但许多致病因素可以破坏角膜的解剖学特性，使穿透性角膜移植术(penetrating keratoplasty, PKP)后的排斥反应发生率大大增加，如血管化角膜、大植片移植、植片偏中心以及角膜化学伤等因素破坏了角膜相对的“免疫赦免”环境，这类角膜移植称为高危角膜移植[7,8]。研究表明，低危眼和高危眼的角膜移植排斥反应均主要由供体特异性DTH介导。实验证明，CD4+T淋巴细胞在角膜移植排斥反应中起主导作用[9]。免疫抑制剂、代谢毒素、抗T细胞表面分子抗体,抗炎症反应药物等制剂都通过免疫抑制来防治同种异体排斥反应。虽然它们大大提高了移植物的存活率，但特异性较差，且抑制全身的免疫反应，长期应用可引起许多严重的眼部和全身性的毒副作用，因此临床使用受到限制[10,11]。近年来研究出了许多特异性较强的防治方法，如诱导供体特异性免疫耐受，避免了非特异性免疫抑制带来的问题，因此发展前景很好。
我们采用碱烧伤后植床新生血管化作为高危眼模型，观察预先诱导供体特异性ACAID对角膜移植片存活情况的影响，旨在探讨在高危眼建立抗原特异性角膜移植排斥反应防治措施的可能性。碱烧伤眼中存在多种高危因素:炎症背景、前房免疫抑制微环境破坏、新生血管形成、Langerhans细胞浸润整个角膜、主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC) I类和II类分子表达增强、ACAID消除。这些高危因素相互影响，使得几乎每一种维持角膜免疫赦免的机制都发生消除。因此，碱烧伤眼是良好的高危眼模型。本实验中此模型角膜植片平均生存时间为25.13±0.64d。
本研究首先建立单眼碱烧伤高危眼模型，然后向正常眼前房注入可溶性抗原预先诱导同种异体抗原特异性ACAID，2wk后行正位角膜移植手术。实验结果显示，与碱烧伤对照组相比，碱烧伤诱导组角膜移植片存活时间延长。两组角膜植片平均存活时间为：碱烧伤对照组25.13±0.64d，碱烧伤诱导组38.25±1.28d，两组植片存活率的差别具有统计学意义（t=25.91，P=0.00）。另外，角膜病理切片显示，碱烧伤对照组中被排斥的植片中角膜水肿，有大量的新生血管形成和密集的炎性细胞浸润；而碱烧伤诱导组中被排斥的植片中虽然角膜发生水肿，但新生血管和炎性细胞均较少。这表明碱烧伤诱导组植片不仅发生排斥反应的时间推迟，而且排斥反应的方式也发生了改变。
综上所述，通过预先诱导供体特异性ACAID，抑制介导角膜移植排斥反应的主要机制—DTH，可以延缓碱烧伤眼同种异体角膜移植排斥反应的发生。然而，通过前房接种同种异体抗原的诱导方法对健眼有一定创伤，临床应用会受到限制，因此寻找有效的体外诱导途径将是此诱导方法应用于临床的先决条件。
【参考文献】
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10 Li X, Gao XW, Reng B, et al. Effect of ICAM1 on the rejection of corneal transplantation in rabbits. Int J Ophthalmol (Guoji Yanke Zazhi)2007;7(4):887890 上一页 [1] [2] |
