材料和方法

　　一、缩瞳、降眼压实验

　　1.瞳孔的测定:将兔固定于箱内,于恒定强度的光线下，用瞳孔尺测定瞳孔直径。

　　2.眼压测定:将兔固定于箱内，安静半小时,用0.4%丁氧普鲁卡因进行眼球表面麻醉,用气动眼压计(美国Digilab model 30R-T pneuma-tonometer)测量眼压,重复测量3次,取其平均值,记录眼压曲线。

　　3.给药方法:将兔的1只眼滴入平衡盐溶液100μl作为空白对照，另1只眼滴入某一浓度丁公藤碱100μl，分别于滴眼后30min、1、2、3、4、5及6h测定双眼瞳孔大小和眼压变化,选取瞳孔缩小和眼压下降最大值进行统计学处理,每一浓度丁公藤碱滴用10只兔眼，共5个浓度50只兔眼。2周后,对照眼仍滴用平衡盐溶液作为空白对照；实验眼先给予4%pirenezepine(M₁受体拮抗剂),30min后,再滴入不同浓度的丁公藤碱,方法同上；观察家兔双眼6h内的瞳孔大小及眼压变化。另取100只兔，将4% pirenzepine改为2% gallamine(M₂受体拮抗剂)或0.4%4-单磷酸脱氧腺苷(deoxyadenosine monophosphate,DAMP)(M₃受体拮抗剂)重复上述实验,即可获得各亚型拮抗剂拮抗丁公藤碱对眼压和瞳孔的药效变化。

　　4.以各累积剂量的对数为横坐标,相应累积效应为纵坐标绘图,可获得S形曲线,按改良Lineweaver-Burk公式使之直线化,求得解离常数(KD)和最大效应(Emax)。将所得数据通过计算机软件,求得丁公藤碱的pD₂值(激动剂解离常数的负对数,表示激动剂对M受体的亲和力)和各亚型拮抗剂的pA₂值(竞争性拮抗剂解离常数的负对数,表示拮抗剂对M受体的亲和力)。

　　二、离体虹膜实验

　　静脉注射空气处死家兔,迅速摘出双眼球,置于冷Ringer-Locke营养液中，细心分离出完整虹膜,按虹膜内等腰三角形三顶端各穿一线,底边二线连于通气钩上,另一端连于拉力换能器上,负荷500mg，平衡1h后,制作不同浓度丁公藤碱虹膜累积量效收缩曲线，然后冲洗虹膜3次，分别加入M₁受体亚型拮抗剂pirenzepine,M₂受体亚型拮抗剂gallamine和M₃受体亚型拮抗剂4-DAMP,其分子质量浓度均为10mol/L，共0.2ml，平衡30min后,再重复不同浓度的丁公藤碱,记录收缩曲线,以各累积剂量的对数为横坐标,相应累积效应为纵坐标绘图,得S形曲线,按改良Lineweaver-Burk公式使之直线化,求得KD和Emax。将所得数据通过计算机软件,求得丁公藤碱的pD₂值和各亚型拮抗剂的pA₂值。

　　三、房水cAMP和cGMP含量的测定

　　雌兔30只,任选1只眼滴0.01%或0.1%的丁公藤碱100μl,对侧眼滴平衡盐溶液100μl；滴药后1、2及4h进行前房穿刺,抽吸0.2ml房水,注入EDTA抗凝剂,用放射免疫法测定房水中环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)和环磷酸鸟苷(cyclic guanosine 3,5-monophosphate;cGMP)含量。

　　结果

　　一、丁公藤碱的缩瞳和降眼压作用

　　丁公藤碱对兔有明显的缩瞳和降眼压作用,其作用强度随药物浓度的升高而加强。缩瞳的pD₂值为3.60±0.15,其最大缩瞳效应为5.10±1.50，其降眼压的pD₂值为3.49±0.07,其最大降眼压效应为6.70±0.26。

　　二、M₁～M₃受体亚型拮抗剂对丁公藤碱缩瞳和降眼压作用的拮抗作用

　　结果表明M₁～M₃受体亚型拮抗剂均能拮抗丁公藤碱的缩瞳和降眼压作用。其拮抗缩瞳作用的pA₂值分别为2.14±0.04(M₁)、1.14±0.01(M₂)及2.48±0.02(M₃),拮抗降眼压作用的pA₂值分别为2.28±0.08(M₁)、1.12±0.01(M₂)及2.90±0.11(M₃)。其中以M₃受体拮抗剂的拮抗作用最强,说明丁公藤碱的缩瞳和降眼压作用主要通过M₃受体介导。

　　三、丁公藤碱对离体虹膜的作用

　　结果显示丁公藤碱缩瞳作用的pD₂值为6.38±0.12,虹膜最大收缩力为12.5±2.31。M₁～M₃亚型拮抗剂拮抗丁公藤碱对离体虹膜收缩作用的pA₂值分别为8.95±0.15(M₁)、7.45±0.07(M₂)及9.67±0.18(M₃),其中以M₃受体拮抗剂的拮抗作用最强,与整体缩瞳的结果一致。

　　四、丁公藤碱对房水中环核苷酸含量的影响

　　表1显示0.01%丁公藤碱在滴眼后2及4h,引起房水cAMP含量降低；滴眼后1、2及4h,引起房水cGMP含量升高（表1）。

表1　两组兔眼用药前后房水环核苷酸含量的比较

　　^*P＜0.01，^**P＜0.05

上一页  [1] [2] [3] 下一页